Определение гепатита C методом ПЦР: что значит анализ и сколько он стоит

Вирусный гепатит С является инфекционным заболеванием, спровоцированным поступлением флавовируса (вирус гепатита) в организм человека, протекающим с преимущественным поражением печени. Одним из методов подтверждения диагноза является анализ ПЦР на гепатит С. Исследование позволяет не только обнаружить вирус, но и в дальнейшем анализировать результаты лечения и активность вирусного агента в организме человека.

врач держит пробирку

Отличительные особенности

Полимеразную цепную реакцию стали использовать для диагностики гепатитов сравнительно недавно — несколько десятилетий назад. Суть исследования заключается в многократном копировании во время ПЦР РНК гепатита или ДНК вируса гепатита. Увеличение количества генетического вирусного материала позволяет обнаруживать даже небольшие концентрации вирусного агента в биологических жидкостях человека.

Исследование на гепатиты проводится следующим способом:

  1. В стерильную пробирку заносится биологический материал человека, в случае обнаружения РНК или ДНК вируса гепатита биологической жидкостью является кровь.
  2. В исследуемый материал помещаются праймеры. Это вещества синтетической природы, структурой напоминающие отрезки искомого гена малой длины.
  3. После вносятся РНК или ДНК полимеразы. Они представляют собой ферменты, способные выстраивать цепочки нуклеиновых кислот, аналогичные имеющимся в материале.
  4. К компонентам вводится ряд свободных нуклеотидов, из которых и будут строиться цепочки.

Далее полученную смесь подогревают до 96 градусов для расщепления ДНК вируса гепатита на две нити. После материал охлаждают, праймеры скрепляют отдельные нити и не дают им снова склеиться. В это же время полимераза «считывает» информацию и начинается синтез цепочек. Циклы нагревания-охлаждения чередуют, в результате чего происходит рост количества генного материала в геометрической прогрессии. Прочий полученный генетический материал также синтезируется, но в линейной прогрессии.

Последним звеном является очистка с помощью электрофореза материала от оставшихся незадействованными нуклеотидов. Содержимое пробирки анализируется на присутствие в крови генетического материала вируса С.

При идеально правильном выполнении определение заболевания возможно даже при присутствии одного вируса в полученном образце крови. Реакция специфична и обладает высокой чувствительностью.

Некоторые сравнивают анализ на гепатит со снятием отпечатков пальцев по своей уникальности.

пробирки с кровью

Суть исследования заключается в многократном копировании ДНК вируса гепатита во время ПЦР

Варианты проведения и нормативные показатели

ПЦР диагностика гепатита может осуществляться с различными целями. Качественное исследование с ПЦР служит для обнаружения вируса в крови для первичной диагностики. Результат анализа показывает, есть ли в крови человека антитела к вирусным частицам. Возможные результаты:

  • «Обнаружено», то есть ПЦР положительный. В результате проведенного анализа в исследуемом материале обнаружен РНК-фрагмент, специфичный для вируса С. Факт инфицирования вирусным гепатитом подтвержден. Вирус циркулирует в организме и при неблагоприятных условиях продолжает инфицировать гепатоциты.
  • «Не обнаружен», то есть ПЦР отрицательный.  Генетический материал вируса гепатита С не обнаружен либо в данный момент концентрация частиц очень низкая — ниже границ чувствительности реакции ПЦР.

Если говорить, через сколько дней после инфицирования может быть обнаружен вирусный агент, то вирус может быть уже обнаружен спустя 7—14 дней после поступления в организм. В это время включается иммунитет и появляются первые антитела.

Чувствительность качественного теста варьируется в пределах 10—500 МЕ\мл. Для проведения диагностики рекомендуется применять системы с чувствительностью не менее 50 МЕ\мл, а желательно с 10—15 МЕ\мл. После однократно полученного результата «обнаружено» диагноз не ставится. Для достоверности по критериям ВОЗ (всемирной организации здравоохранения) лабораторией должен быть получен трехкратный положительный качественный тест на гепатит С. Гепатиты В и С могут иметь разные генотипы. В России наиболее вероятными являются 1, 2 и 3 типы.

ПЦР – качественный анализ, имеет 100 % специфичность определения всех модификаций вирусного агента.

ПЦР на гепатит С, количественный метод — следующий вариант полимеразной цепной реакции. Используется для диагностики вирусной нагрузки. Помогает определить виремию – концентрацию вирусного агента в крови, то есть количество вирусных частиц в единице объема генетического материала.

Норма результатов для каждой лаборатории может отличаться, но чаще используются следующие показатели:

  • 800000 МЕ\мл. Высокий уровень виремии. Соответствует активному течению болезни. Вирус инфицирует новые клетки печени, заболевание нуждается в интенсивном лечении.
  • 400000 МЕ\мл. Низкая виремия.
  • «Ниже диапазона измерений». Данное заключение свидетельствует, что антитела к вирусу и сам вирус гепатита С в организме присутствуют, но РНК с помощью теста не определяется. Концентрация вирусного агента в крови очень мала. Для постановки диагноза в данной ситуации всегда требуется дополнительно выявить, есть ли антитела с качественной реакцией.
  • «Не обнаружено». Тест-система не смогла обнаружить РНК гепатита С.

Количественный тест очень важен в период лечения гепатита С. Он позволяет оценить результат терапии. При медленном снижении виремии человек нуждается в коррекции лечения — противовирусную терапию следует модифицировать. Человеку, находящемуся на лечении, рекомендуется провести первую количественную диагностику примерно после 12-й недели от начала терапии.

Последним вариантом диагностики с методом ПЦР является генотипирование. Способ используется нечасто. Применяется, если необходимо точно определить генотип поступившего вируса С. Всего известно об 11 генотипах вируса гепатита С. В России и на территории бывшего СНГ чаще встречаются 1, 2 или 3 варианты. Есть ли норма значения? Нет. Такого варианта, как норма, в данной ситуации нет. Лаборатория дает заключение в виде цифры, указывающей на генотип вируса, или же вывода «не типируется», если вирус не определен тест-системой.

врач берет кровь из вены

Для достоверности лабораторией должен быть получен трехкратный положительный результат на гепатит С

Правила сдачи материала

Для правильной диагностики важна правильность сдачи биологического материала — в данном случае крови. Рекомендации специалистов:

  • Кровь сдается натощак: от последнего приема пищи должно пройти не менее 8 часов.
  • Накануне исследования за день-два стоит отказаться от приема алкоголя, жареной и жирной пищи.
  • Лучше исключить физические и нервно-психические перегрузки.

Общей рекомендацией перед проведением теста является достаточный сон и исключение курения. Повлиять на показатели вирусемии или дать ложный результат не могут курение или употребление жареного. Однако после забора в крови могут произойти гемолиз и прочие изменения, что затруднит диагностику.

Ошибки

Результаты исследования могут быть ложноположительными и ложноотрицательными. К ложноотрицательным могут привести:

  1. Введение гепарина. Вещество препятствует свертыванию крови.
  2. Загрязнение биологического материала во время забора крови или уже в пробирке.
  3. Наличие в исследуемом материале веществ, способных блокировать «работу» ферментов.

Естественно, что ложноотрицательный результат может иметь место при неправильном выполнении анализа. Человеческий фактор может быть обусловлен неопытностью медицинского персонала, случайной подменой пробирок, ошибкой лаборанта или опечаткой, нарушением подготовки образцов биологической жидкости к ПЦР, повышением температуры воздействия.

Ложноположительный результат может наблюдаться при:

  • Аутоиммунных заболеваниях.
  • Опухолевых процессах.
  • Остром периоде других инфекций, схожих по протеканию с патогенезом вирусного гепатита С.
  • Вакцинации от гепатита.
  • Проведении лечения препаратами интерферона альфа.
  • Повышенном уровне билирубина.

Нередко неправильные результаты исследования обнаруживаются во время беременности. Во время подготовки к материнству организм женщины вырабатывает большое количество специфических белков. Параллельно изменяется гормональный фон будущей мамы, повышается количество специфических веществ цитокинов, участвующих в межклеточной регуляции. Предусмотреть все происходящие изменения невозможно, поэтому положительный результат во время беременности – не повод для паники. Всем будущим мамам показана повторная диагностика, в том числе прочими способами, например иммуноферментным анализом. Сочетать ИФА и ПЦР можно и прочим категориям обследующихся с ложноположительными результатами.

Ориентировочные расценки

Стоимость исследования ПЦР на вирусный гепатит С существенно колеблется. Причем не всегда качество определяется уровнем используемых тест-систем, поэтому ориентироваться при выборе клиники исключительно на цену не стоит.

Наименование исследования Цена
Качественное исследование От 500—750 российских рублей.
Ультрачувствительное количественное определение От 1200 до 10000 руб. Определение вирусемии в режиме реального времени с детекцией обойдется в 17000—22000 руб.
Генотипирование 1000—1200 руб.

Определить, какое именно ПЦР исследование вам необходимо на данный момент, должен врач-инфекционист. Для первичной диагностики чаще используется качественный анализ. После трехкратного подтверждения положительного результата и постановки диагноза может потребоваться определение вирусемии для оценки степени агрессивности терапии.